Плита фбс: Блоки ЖБИ фундаментные (фбс) купить на заводе

Содержание

Блоки ФБС: характеристики, преимущества, область использования

13.07.2020

Аббревиатура ФБС означает «фундаментные блоки сплошного сечения». Материал используется для возведения сборных ленточных фундаментов, и его характеристики позволяют значительно сократить сроки работы над проектами малоэтажных сооружений различного назначения.

Такие бетонные блоки активно применяются для строительства коттеджей, гаражей, помещений сельхозназначения, производственных цехов и прочих построек. С их помощью также возводятся стены подвалов.

В отличие от монолитных вариантов, в случае выбора блочного фундамента из ФБС нет необходимости ждать целый месяц, пока залитый бетон наберет нужную прочность. Кроме того, благодаря специальным присадкам, предусмотренным технологией изготовления, этот вид ЖБИ наделен высокой морозостойкостью и устойчивостью к агрессивной среде, перепадам температур.

Основные технические характеристики блоков ФБС:
Изделия имеют прямоугольную, горизонтально вытянутую форму.

Выпускаются как полноразмерные, так и доборные блоки (укороченные).

Элементы изготавливаются, согласно ГОСТ, из бетона марок М100 (B7,5) или М200 (В15) — тяжелого, легкого, пористого или плотного силикатного.

Конструкция предусматривает наличие монтажных зазоров по бокам и металлических петель для строповки. Монтажные петли должны изготавливаться из стержневой горячекатаной гладкой арматуры класса А-I либо периодического профиля Аc-II.

Параметры морозоустойчивости и водонепроницаемости определяются согласно СНиП 2.03.01 и СНиП 2.03.02 исходя из особенностей проекта.

Номенклатура (размеры блоков ФБС)
В продаже доступны такие варианты продукции:

Маркировка расшифровывается следующим образом (на примере ФБС 24.4.6-Т):
ФБС — фундаментный блок сплошной;

24.4.6 — размеры изделия в дециметрах, где 24 — длина (L) 2380 мм, 4 — ширина (В) 400 мм, 6 — высота (Н) 580 мм. Значения округляются.

Т — тяжелый бетон.

Если в конце обозначения марки фигурирует буква «П», это означает, что изделия изготовлено из пористого бетона. Буквы «Л» и «С» — это, соответственно, легкий и силикатный. При достаточном обосновании, технологические требования допускают применение других классов бетона, помимо B7,5 и В15. В таких случаях в условное обозначение блоков для фундамента включается дополнительный цифровой индекс перед буквой, характеризующей вид бетона. Необходимая модификация изделия выбирается исходя из этажности будущего здания, планируемых нагрузок, типа грунта.

Особенности монтажа блоков ФБС
Возможны 2 варианта подготовки оснований для укладки ФБС-блоков:

тщательно выровненный песок с уложенной поверх него сеткой;

монолитная бетонная подушка, представляющая собой подобие невысокого ленточного фундамента. К монтажу блоков на такое основание можно приступать спустя неделю после его заливки.

Изделия устанавливаются по принципу стандартной кирпичной кладки, скрепляясь цементным раствором. Верхний элемент должен перекрывать стык между двумя нижними. В выемки по бокам заливается бетон, в результате чего образуется конструкция, не успупающая в прочности монолитному фундаменту. Ввиду большого веса ФБС работа требует применения специальной техники.

В качестве дополнительной меры по усилению конструкций специалисты рекомендуют укладывать в монтажные зазоры между блоками армирующие элементы. Для защиты от воздействия влаги и продления эксплуатационного срока на швы и поверхность блоков наносится битумная гидроизоляция.

Производство ФБС-блоков в России нормируется предписаниями ГОСТ 13579-78.

фундаментный блок сплошной – цены от производителя

Фундаментальные блоки ФБС – один из самых дешевых и востребованных материалов для фундамента или оформления стен в подвалах. Для его изготовления используется бетон марки М-100, но к подбору сырья и технологиям изготовления предъявляются строгие требования, которые направлены на повышение качества продукции.

Завод «Бетонресурс» – надежный производитель блоков ФБС. При изготовлении мы руководствуемся требованиями ГОСТ 13579−78 и проверяем продукцию перед продажей. Наши заказчики получают качественные и надежные материалы по справедливой цене.


Цены на сплошные фундаментные блоки

Наименование изделий,
Серия, ГОСТ

Габаритные размеры
Длина, ширина, высота

Вес
Кг

Цена
Руб
Блоки бетонные для стен подвалов ГОСТ    
ФБС 24-3-6т 2400 х 300 х 600 975 1550
ФБС 24-4-6т 2400 х 400 х 600 1300 2050
ФБС 24-5-6т 2400 х 500 х 600 1630 2600
ФБС 24-6-6т 2400 х 600 х 600 1960 3050
ФБС 12-3-6т 1200 х 300 х 600 485 900
ФБС 12-4-6т 1200 х 400 х 600 640 1050
ФБС 12-5-6т 1200 х 500 х 600 790 1400
ФБС 12-6-6т 1200 х 600 х 600 960 1600
ФБС 9-3-6т 900 х 300 х 600 350 650
ФБС 9-4-6т 900 х 400 х 600 470 800
ФБС 9-5-6т 900 х 500 х 600 590 950
ФБС 9-6-6т 900 х 600 х 600 700 1200
ФБС 8-6-6т 800 х 600 х 600   1170
ФБС 8-5-6т 800 х 500 х 600   900
ФБС 8-4-6т 800 х 400 х 600   750
ФБС 8-3-6т 800 х 300 х 600   600

Технология изготовления

Производство блоков ФБС осуществляется вибропрессованием на специальных станках, которые обеспечивают равномерную усадку материала и повышают его прочность. Благодаря такой технологии бетон уплотняется, повышается его жесткость и эксплуатационные характеристики. Перед продажей каждая единица проверяется на соответствие требованиям государственных стандартов.

Этап изготовления блоков ФБС:

  • смазывание стенок емкости станка для исключения прилипания смеси;
  • заливка подготовленного бетона и закрепление монтажных петель;
  • запуск станка и выдерживание раствора в условиях вибраций и прессования;
  • извлечение и шлифование заготовки.

На каждом этапе выдерживаются требования по температуре и временным интервалам, после запрессовки блок остается в емкости до полного затвердевания. Полученные заготовки отправляются на склад, где хранятся до реализации.

Блоки ФБС востребованы в строительстве – они прочные, стыки обеспечивают подвижность при укладке. Для их изготовления используются более дешевые материалы, чем для монолитных плит, что повышает их доступность для каждого клиента. Также блоки обладают низкой теплопроводностью, устойчивы к воздействию влаги и низких температур.


Другие типы фундаментных блоков



Закажите Блоки ФБС в компании «БетонРесурс»

Блоки фундаментные (ФБС) Волгоград

Бетонный завод PSK-SK предлагает купить блоки ФБС заводского качества в Волгограде и благодаря собственному производству и доставке может предложить низкие цены на продукцию. Блоки фундаментные ФБС представляют собой изделия из тяжелого бетона, которые используются при обустройстве и монтаже цоколей, стен подвалов, фундаментов

Что представляют собой ФБС?

Маркировка (пример): ФБС 24-6-6т (2380x600x580 мм)

  • ФБС — фундаметный блок сплошной
  • 24 — длина, дм
  • 6 — ширина, дм
  • 6 — высота, дм
  • т — изготовлен из тяжелого бетона

    • Размеры и цена на блоки ФБС
    БЛОКИ БЕТОННЫЕ ФУНДАМЕНТНЫЕ,   ГОСТ 13579-78
    Наименование изделия длина ширина высота объем, м³ вес, т БЕЗНАЛИЧНЫЙ РАСЧЕТ С НДС НАЛИЧНЫЙ РАСЧЕТ БЕЗ НДС
    ФБС 24-3-6 т 2380 300 580 0,406 0,98 2295 2095
    ФБС 24-4-6т 2380 400 580 0,543 1,3 2895 2495
    ФБС 24-5-6т 2380 500 580 0,679 1,63
    3595     		3195
    ФБС 24-6-6т 2380 600 580 0,815 1,96 4195 3895
    ФБС 12-3-6т 1180 300 580 0,203 0,48 1275 1195
    ФБС 12-4-6т 1180 400 580 0,272 0,64 1675 1395
    ФБС 12-5-6т 1180 500 580 0,339 0,79 1895 1750
    ФБС 12-6-6т 1180 600 580 0,407 0,96 2375 2095
    ФБС   8-3-6т 780 300 580 0,136 0,33 995 915
    ФБС   8-4-6т 780 400 580 0,172 0,43 1195 1095
    ФБС   8-5-6т 780 500 580 0,226 0,56 1395 1275
    ФБС   8-6-6т 780 600 580 0,271 0,67 1795 1650
    ФБС 9-3-6т 880 300 580 0,146 0,35 1095 995
    ФБС  9-4-6т 880 400 580 0,195 0,47 1395 1250
    ФБС  9-5-6т 880 500 580 0,244 0,59 1575 1395
    ФБС  9-6-6т 880 600 580 0,293 0,7 1995 1750
    ФБС 24-2-3т 2380 200 300 0,144 0,36 1395 1275
    ФБС 24-3-3т 2380 300 300 0,2 0,5 1475 1295
    ФБС 24-4-3т 2380 400 300 0,26 0,65 1775 1550
    ФБС 24-5-3т 2380 500 300 0,333 0,83 2195 1695
    ФБС 24-6-3т 2380 600 300 0,4 1 2550 2250
    ФБС 12-3-3т 1180 300 300 0,1 0,24 895 795
    ФБС 12-4-3т 1180 400 300 0,127 0,31 1050 950
    ФБС 12-5-3т 1180 500 300 0,159 0,38 1095 995
    ФБС 12-6-3т 1180 600 300 0,191 0,46 1295 1095
    ФБС 9-3-3т 880 300 300 0,074 0,18 625 555
    ФБС  9-4-3т 880 400 300 0,1 0,25 895 795
    ФБС  9-5-3т 880 500 300 0,12 0,3 995 895
    ФБС 9-6-3т 880 600 300 0,148 0,37 1195 1075

    *возможно изготовление блоков ФБС индивидуальных размеров и любой марки бетона

    Плиты фундаментные железобетонные: виды- прямоугольные и плоские и армированные +Фото и Видео

    Устройство и расчёт фундаментной плиты. Когда строительство находится на этапе возведения дома, самая большая нагрузка идет на основание, т.е. фундамент. Чтобы основание могло выдержать конструкцию, не треснуло и не просело, уделите ему особое внимание.

    Да, при строительстве нельзя экономить, особенно при выборе фундаментной плиты.

    Это тот материал, из которого выходит замечательная, несложная и прочная несущая конструкция.

    Фундаментные плиты и их характеристики

    Форма

    Железобетонные фундаментные плиты для фундамента ленточного вида имеют прямоугольную форму. Для этого изделия используют тяжелый бетон (с маркировкой Т), керамзитбетон (с маркировкой П), а иногда и силикатный бетон (с маркировкой С). Обычно применяют для закладке цокольных этажей, подвалов и фундамента.

    Стандарты

    На производстве изготавливают со строгим соблюдением норм ГОСТа. Бетонные блоки имеют отличия по характеристикам и области применения:

    • ФБС – фундаментные блоки полнотелые. Их часто используют для создания несущих конструкций, цокольных помещений и подвалов.
    • ФБП – пустотные плиты, которые имеют отверстие с одной стороны.
    • УДБ – плиты, которые называют «дырчатыми». В них отверстия бывают в виде усеченных пирамид или просто равномерные.
    • ФЛ – фундаментные подушки. Их используют в качестве основы под бетонные блоки.

    На плоскостях торцового вида располагаются специальные пазы, которые соединяют плиты друг с другом. Чтобы работать было удобнее, на плитах размещают по две петли. Сами плиты между собой имеют отличия в виде наличием/отсутствием пустот, а также размерами и весом. Плита ФБС по длине бывают 90см, 120 см, 240 см,  по ширине 30 см, 40 см и 50 см, а по высоте от 30-ти до 60-ти см.

    Назначение, материал и размеры плиты фундамента зашифрованы в маркировке. Если вы увидели маркировку ФБС 12.4.6, то это означает, что данный блок предназначен для возведения стен из тяжелого бетона, с размерами 1,2 м длины, 0,4 м ширины и 0,6 м высоты.

    Виды

    ФБС – применение и характеристики

    Стеновые фундаментные блоки (полнотелые) представляют собой железную конструкцию, которая по форме похожа на параллелепипед. Такие блоки делают их твердого бетона высокого качества, есть усиление стальной арматурой, что дает возможность выдерживать большие нагрузки. По характеристикам ФБС не проигрывает монолитным основаниям. Область применения широка, так как можно использовать при строительстве многоэтажек, делать перекрытия и перегородки.

    Часто используют при строительстве промышленных строений и оградительных щитов на стройплощадках. Некоторые характеристик приведем ниже:

    • Прочность на сжатие – В12,6 (М150).
    • Прочность материала – 105-111 кг/см.
    • Плотность до 2,4 т/м3.
    • Устойчивость к морозам марки F200.
    • Водонепроницаемость по марке W2.

    У ФБС также разные размеры, их этот показатель тоже классифицируют. От размеров зависит уровень нагрузки, которых может выдержать плита. И не зря – главным назначение фундаментных плит является равномерное распределение нагрузки на поверхность основания. По этой причине размеры следует подбирать по предполагаемой нагрузке.

    Типичные параметры:

    • Длины – 90 см, 120 см, 240 см.
    • Ширина – 30 см, 40 см, 50 см и 60 см.
    • Высота – 60 см (очень редко бывает показатель в 30 см).

    Обратите внимание, что изредка бывает погрешность в весе и размере. Как правило, погрешность размеров не выше 2 см.

    Немаловажная характеристика – масса плиты. ФБС представляет собой сплошную конструкцию без пустот, что сказывается на весе. В первую очередь это сложности при транспортировке. В зависимости от марки плиты могут быть от 250 кг до 2 т весом.

    При изготовлении данного стройматериала используют такие компоненты, как вода, цемент и наполнитель. Консистенция выдерживают, а для соединения элементов их замешивают в бетономешалке. После того, как получили однородную массу, ее разливают по формам с вибраторами, которые утрясут раствор и уплотнят его. Плиты изымают спустя сутки и на них наносят защитное покрытие, после чего хорошо промывают водой. Материал можно применять спустя 28 суток.

    Внимание! Если вы будете производить монтаж фундамента из железобетонных плит, позаботьтесь о гидроизоляции, которая будет защищать их от влаги. Это может быть композитная смесь ид гидрофобизаторов и битума.

    ФБП и его применение

    Пустотные фундаментные блоки являются весьма прочным материалом из бетона. Он широко используется в области строительства. Обычно строители используют его при  закладке фундамента производственных помещений, для строительства подвальных помещений и цокольных этажей.

    У ФБП прямоугольная форма с с некоторыми пустотами, которые находятся на дне плиты. Наличие пустот нужно для того, что в дальнейшем заполнить их утеплителем или залить бетоном и сделать монолитную конструкцию. Часто ФБП используют для фундамента в производственных помещениях.

    При их помощи есть возможность смонтировать защитный кожух при укладке труб систем водоснабжения и отопления. Часто их используют в строительстве дорог, а именно для создания ограждений. В последнее время его используют и при возведении стен в неотапливаемых помещениях.

    УДБ блоки

    Универсальные дырчатые блоки – достаточно интересный материал для постройки помещений под землей. Это практично в тех случаях, когда планируют делать в здании высокие потолки. Есть смысл использовать их в том случае, если вы будете закладывать фундамент  в месте, где будет большая нагрузка.

    По строение УДБ – фундаментные железобетонные плиты, которые имеют определенное количество отверстий. Во время монтажа их укладывают так, чтобы отверстия совпадали между собой. Благодаря этому получаются каналы, которые в дальнейшем можно армировать и залить высокопрочным бетоном. Это нужно для того, чтобы конструкция была очень прочной и имела высокий уровень износостойкости.

    Обратите внимание, что довольно часто для экономии не все каналы заливают бетоном, но этот процесс обязателен для угловых и еще некоторых каналов, которые равномерно расположены по периметру.

    Габариты:

    • Длины от 120-ти до 600 см. Каждый параметр становится больше на 60 см.
    • Ширина 60 см.
    • Высота 58 см.
    • Отверстий может быть от 2 до 8, это зависит от длины блока.

    Блоки ФЛ и их особенности

    Подушки фундамента используют при установке фундамента ленточного типа. Это фундаментная плита из бетона трапециевидной формы. Внутри плита армирована каркасом из стальной арматуры.

    Она предназначена для распределения нагрузки на основание, тем самым увеличиваю опорную площадь. При производстве ФЛ обязательно придерживаются правил, при выполнении которых прочность материала будет гарантирована, а сама плита будет устойчива к образованию коррозии и появлению трещин. Обычно используют тяжелый бетон при изготовлении ФЛ, а также стальную арматуру и армирующий каркас из прутьев.

    Но сейчас стали часто появляться подушки, а точнее фундаментные плиты, армированные струнобетонными стержнями. Фундаментные подушки бывают двух видов  — ребристые и решетчатые. Новые технологии дают возможность затрачивать на таком производстве меньше металла и бетона, что не сказываются на свойствах отрицательно. Обычно используют при возведении зданий, которые имеют большую нагрузку. Также актуальны при строительстве цокольных  и подвальных этажей.

    «Эти плиты можно использовать при закладке на любом виде грунта. Им подойдут любые условия климата. Такие подушки устойчивы к сейсмическим изменениям»

    Монтаж фундаментных плит

    Начало

    Перед началом установки конструкции, подготовьте все заранее. Мы подготовили для вас список всех нужных материалов и инструментов:

    • Фундаментные плиты.
    • Материалы для фундаментных плит.
    • Смесь для соединения плит.
    • Строительный миксер или бетономешалка для подготовки смеси.
    • Песок для создания подушки под конструкцию.
    • Устройства для переноса материалов на место строительства.
    • Строительные инструменты наподобие строительного уровня, рулетки, нивелира и проч.

    Монтаж плит следует проводить только в теплую и сухую погоду. Не нужно укладывать плиты на влажную землю.

    Итак, в первую очередь на участке проводим уровни и оси. Далее следует подготовить участок и перейти к подготовке песчаной подушки. Для этого вам нужно будет просеять песок и пересыпать его на дно траншеи слоем в 6-11 см. Ширина подушки должны быть на 20 см шире будущего фундамента. Песок после засыпания хорошо утрамбовываем, поливаем водой и оставляем высыхать. Под фундамент столбчатого типа подушку нужно делать из песка и гравия, а сверху это все поливаем битумом.

    Важно: нельзя делать подушку на влажной земле. Этот слой нужно снять. Если же почва песчаная, можно не делать подушку, а сразу укладывать блоки на землю.

    Продолжение

    После того, как песчаная подушка готова, нужно перейти к переносу осей и прочих меток по проектировке. Шнур-причалку натягивают так, чтобы они в дальнейшем не касался боковых стенок блоков. Начнем монтирование фундаментных плит, которые будут маяками. Их ставят по углам и при пересечении стен.

    От правильности и точности размещения зависят результаты работы. После того, как маяки проставлены, шнур-причалку переставляют так, чтобы она задевала ребра боков-маяков. Это будет ориентир для того, чтобы укладывать оставшиеся плиты. Отклонение от размеров по плану может быть до 1 см. Для устранения отклонения воспользуйтесь ломом, которым вы сможете сдвинуть блоки. После того, как первый ряд готов, можно приступить ко второму, делая все по аналогии.

    Перед началом установки фундаментных плит продумайте расположение всех коммуникаций, и в местах их установки сделайте разрывы между блоками.

    Преимущества и недостатки фундаментных плит из бетона

    У такого фундамента есть много преимуществ, если сравнивать с монолитными блоками:

    • Скорость возведения конструкции. Если при укладке ленточного фундамента нужно ждать около месяца для продолжения строительства, то блочное основание позволит приступить к работе уже через пару дней.
    • Надежность и прочность. Блоки фундамента изготавливают по всем параметрам и нормам при помощи специализированной техники.
    • Фундаментные плиты подойдут для монтажа основания любого здания. При помощи этого материала вы сможете смонтировать любую по сложности и конфигурации конструкцию. Размеры бывают разными, что дает возможность использовать этот строительный материал как для постройки домиков, так и многоэтажек.
    • Удобство использования. При помощи петель на верхних границах можно с легкостью перемешать блоки, а пазы и одинаковые размеры дают возможность быстро и легко соединять плиты между собой.
    • Фундаментные плиты можно использовать при любых условиях климата.

    Несмотря на это, есть и ряд недостатков:

    • Большие затраты в плане финансов. Если учесть вес плит, вам потребуется взять в аренду подъемную технику.
    • После того, как с укладкой будет покончено, вам нужно будет произвести двойную гидроизоляцию.
    • Срок эксплуатации нужно будет продлить,  а это возможно лишь благодаря утеплению швов. Для этого вам понадобится пенополистирол и много денег.

    Итоги

    Если говорить в целом, фундаментные плиты смогли хорошо себя зарекомендовать, но все же при выборе материала обращайте внимание на качество. Так вы сможете быть точно уверены в успехе строительства!

    Документ без названия

    Документ без названия

    Это стандартный протокол замораживания для замораживания ES-клеток, который можно использовать для замораживания флаконов с ES-клетками для будущего нацеливания или целевых клонов.


    1. Накормите клетки за 2 часа до замораживания.
    2. Аспирируйте среду и промойте лунки PBS.
    3. Добавьте трипсин (0,05%) и инкубируйте 5 мин при 37 ° C: 96-луночный планшет — 30 мкл / лунку
    24-луночный планшет — 100 мкл / лунку
    6-луночный планшет — 500 мкл / лунку
    Блюдо 10 см — 2 мл / тарелка
    4. Добавьте среду для ES-клеток в количестве, вдвое превышающем объем трипсина, т.е. на 500 мкл трипсина добавьте 1 мл среды
    . 5. Титруйте 4-5X
    6. Поместите в конус объемом 15 мл и вращайте в течение 5 минут со скоростью 1000 об / мин

    .

    7. Сделайте замораживающую среду: 20% ДМСО, 80% FBS.
    Для каждого флакона с клетками вам потребуется 250 мкл холодной среды FBS и 250 мкл среды для холодной заморозки, для общего объема 500 мкл. Для 1 конфлюэнтной лунки 6-луночного планшета мы замораживаем 4 флакона на лунку.
    Чтобы заморозить 1 лунку 6-луночного планшета:
    FBS: 4 флакона X 250 мкл / флакон = 1 мл
    Среда для замораживания: 4 флакона X 250 мкл / флакон = 1 мл X.2 = 200 мкл ДМСО
    X .8 = 800 мкл FBS

    8. Промаркируйте пробирки с открытыми крышками и держите среду на льду.
    9. Удалите надосадочную жидкость из конической пробирки объемом 15 мл.
    10. Добавьте соответствующий объем FBS (только) и титруйте.
    11. Добавьте соответствующий объем среды для замораживания, пипеткой 2-3X для перемешивания и аликвоты 0,5 мл / криопробирку.
    то есть для конфлюэнтной лунки 6-луночного планшета вы должны добавить 1 мл FBS, титровать, добавить 1 мл замораживающей среды, перемешать и аликвотировать в 4 криопробирки.
    12. Поместите криопробирки в штатив для пробирок из пенополистирола и поставьте на -80 ° C. На следующий день клетки можно поместить в жидкий N2.

    ПРИМЕЧАНИЕ: Лучше не оставлять клетки дольше 2 недель при -80 C.

    Ссылки на службы Forms Вернуться на главную страницу протокола Вернуться на домашнюю страницу ES Core

    1 номерной знак FBS с сайта Regplates.com. Проверить последнюю доступность сейчас. Позвоните нам по телефону 01482627628

    Покупка желанных номерных знаков с регистрационными номерами

    При покупке номерных знаков мы позаботимся о хлопотах для вас, так как наша преданная и опытная команда позаботится о том, чтобы процесс передачи был максимально простым. Мы оформим для вас все необходимые документы, включая ваши автомобили V5 и действующий сертификат MOT. Это означает, что вы можете наслаждаться своим новым персонализированным номерным знаком без напряжения и хлопот, связанных с запутанной бумажной работой. Наша репутация говорит сама за себя, у нас рейтинг 5/5 в Reviewcentre и лучшие отзывы в нашем магазине ebay.

    Мы зарегистрированные реселлеры DVLA, признанные и поддерживаемые самим DVLA. Как «RNPS» (номер лицензии 47727) мы можем поставлять номерные знаки в соответствии со всеми правилами DVLA и MOT.Это означает, что вы можете быть уверены, что ваша покупка будет обработана профессионально и что мы доставим именно то, что вы заказываете. Вы можете найти нашу ссылку прямо на их сайте для душевного спокойствия.

    Что говорят наши клиенты

    «Первоклассное обслуживание от первоначального запроса до оформления документов. Без колебаний рекомендую или использую снова. Никогда не думал, что покупка частной тарелки была такой простой и понятной ». — Стюарт на Trustpilot.

    «Совершенно профессионально, как я и надеялся.Первоклассное общение по электронной почте, а также устно, когда я звонил, чтобы уточнить детали. Хорошая цена, за которой следует гораздо больше, например, очень хорошо сделанные тарелки, помещенные в специальный мягкий конверт; и именно эта «правильная работа» побуждает меня присудить пять звезд и всем сердцем их рекомендовать. Отличная работа!» — Мистер Битти на Trustpilot.

    «Когда я увидел отзывы, подумал, что это слишком хорошо, чтобы быть правдой. Сюрприз, удивление, Regplates сделали именно то, что обещали. Купил рег номер, пластинки приехали в течении 3х дней, все сделали за 5 рабочих дней.Великолепно, спасибо. » — Тони Би на Trustpilot.

    Regplate имеют более 99% всех доступных номерных знаков, доступных для покупки через Интернет 24 часа в сутки. Мы являемся членами ассоциаций торговых дилеров MIRAD, APRT & CNG.

    Если вы хотите продать частный номерной знак, наш отдел оценки персональных номерных знаков может предоставить вам точную рыночную стоимость вашего регистрационного номера по почте или по электронной почте.

    Персонализированные таблички с любимыми номерами

    С момента своего скромного появления в 1903 году заветные числа продолжали набирать популярность, часто добавляя последний штрих к нашему ценному имуществу и очень часто оказываясь ценным вложением.

    Первый номерной знак в истории

    A1 присвоено в 1903 г.

    Закон об автомобилях 1903 года, вступивший в силу 1 января 1904 года, требовал, чтобы все автотранспортные средства были внесены в официальный реестр транспортных средств и имели номерные знаки. Закон был принят для того, чтобы автомобили можно было легко отследить в случае аварии или нарушения закона. Таблички с регистрационными номерами транспортных средств в Великобритании имеют прямоугольную или квадратную форму, при этом точные разрешенные размеры таблички и ее надписи установлены законом.

    Вы можете узнать, где изначально был выдан ваш персональный регистрационный номер, здесь.

    Antique FBS Германия Королевская портретная тарелка в стиле Вены: Коллекционное соединение

    Винтажная позолоченная портретная тарелка в королевском венском стиле

    Kays Glass and Antiques

    $ 45

    Тарелка с сценой в стиле Неаполе в королевском венском стиле

    Продажа антиквариата Хармон.

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 48

    Миниатюрная королевская венская фарфоровая портретная ваза

    Sakai Antiques, Inc.

    $ 495 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Старинная восьмиугольная портретная тарелка Королевской Вены — Рут — расписанная вручную, подпись

    Валери Антиквариат слоновой кости

    $ 650

    Королевская венская портретная тарелка

    Антиквариат Корки

    $ 225

    PH Леонард Австрия Королевский Венский стиль Ручная роспись портретная тарелка Возрождение эпохи Возрождения

    Коллекционное соединение

    $ 73 Цена продажи ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Королевская венская переливающаяся фарфоровая портретная ваза

    Sakai Antiques, Inc.

    $ 1,495 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Royal Rudolstadt, расписанная вручную подписанная тарелка в королевском венском стиле

    ChristiesCurios

    $ 475 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Монументальная королевская венская портретная ваза — Мадам Рекаймер

    Jay’s Eye

    $ 785 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Старинная королевская венская портретная тарелка — Обнаженная женщина с нарисованными вручную волнами херувимов

    Валери Антиквариат слоновой кости

    $ 650

    Впечатляющая королевская венская ваза с изображениями.

    Оценка HMG

    750 долл. США

    Миниатюрная портретная ваза из королевского венского фарфора с цветочным рисунком

    Sakai Antiques, Inc.

    $ 495 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Красота в антикварной королевской венской фарфоровой раме

    Sakai Antiques, Inc.

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 2,750

    Фарфоровая тарелка Royal Vienna с изображением женщины и купидона

    Southampton Antiques

    $ 995

    Королевская Вена, расписанная вручную подписанная кабинетная тарелка Odysseus and Telemacos

    Jmama Treasures

    $ 395

    Большое антикварное королевское венское фарфоровое зарядное устройство

    Sakai Antiques, Inc.

    $ 1,750 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Подписанная расписанная вручную фарфоровая корзина Royal Vienna

    Stephen A. Kramer Ltd.

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 60

    Королевская венская фарфоровая статуэтка молодой женщины. Антиквариат Королевский венский фарфор Австрия 18-19 век

    LR Антиквариат

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 950

    Антикварная королевская венская фарфоровая тарелка с портретом на шкафу с подписью

    Chernov Interiors

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 1,500

    Исключительная антикварная расписанная вручную королевская венская фарфоровая тарелка Наполеона

    Галерея M&M

    1 600 долл. США 9000 3

    Венская королевская фарфоровая крытая урна с 1883 по 1906 год

    LR Antiques

    $ 1,250 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Royal Vienna 9-дюймовый крытый кувшин на пьедестале

    Антиквариат и предметы коллекционирования Lainey

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 250

    Большой антикварный фарфоровый сервировочный поднос в королевском венском стиле около 1900 года

    Flanagan & Lane Antiques LLC

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 245

    Великолепная пара фарфоровых ваз Royal Vienna

    Sakai Antiques, Inc.

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 24 500

    Фарфор Royal Vienna Викторианская тарелка с обнаженными нюансами в бронзовой раме

    Southampton Antiques

    $ 1,150

    Antique Royal Vienna Style Toilette de Venus Фарфоровая банка сгущенного джема с крышкой

    Антиквариат Березового зала

    $ 325 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Портретная урна в королевском венском стиле

    Pazzaz

    $ 165 Цена со скидкой 49%

    Старинный королевский венский фарфор Ewer Классические фигуры XIX века

    Regent Antiques

    ~ $ 1,744

    Пара венских портретных тарелок диаметром 9 1/2 дюйма

    Коллекция Штеффена

    $ 195 Цена со скидкой 34%

    Расписанная вручную портретная тарелка на шкафчике, принцесса де Ламбаль, стиль Королевской Вены

    Амфора Искусство и антиквариат

    $ 1,250 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Тарелка Royal Vienna с изображением женщины, играющей на лютне, для двух девочек

    Southampton Antiques

    $ 995

    Старинные настенные тарелки Королевской Вены, помеченные и датированные ок.1900

    Замок Антиквариат

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 850

    Старинный фарфор, портретный поднос в королевском венском стиле

    Green Country Estates — Tulsa Antiques LLC

    $ 345

    Редкая и исключительная королевская венская фарфоровая тарелка «Король Людовик XVI» Вагнера

    Галерея M&M

    2 600 долл. США

    Крытая коробка в форме яйца из фарфора Royal Vienna с красотой

    Sakai Antiques, Inc.

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 2,250

    Королевская Вена XVIII века Императорская фарфоровая чашка и блюдце

    Амфора Искусство и антиквариат

    ПРЕДЛОЖЕНИЕ $ 4 400

    Венская королевская урна с крышкой высотой 25 дюймов…

    Антиквариат Личфилда

    1 200 долл. США 9000 3

    Королевская венская фарфоровая портретная ваза с ручной росписью — 1880-е годы — подпись художника

    Вниз по дороге Антиквариат

    $ 1,895 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Королевская Вена Викторианской эпохи сочетается с парой кобальтово-синих ваз с женщинами.

    Саутгемптон Антиквариат

    2 650 долл. США

    Royal Vienna VENUS & THETIS Изысканная позолоченная фарфоровая ароматическая бутылка с ручной росписью

    Gary Germer

    $ 1,595

    Вена Австрия ручная роспись улья портретная тарелка Venus in Bade

    Finer Choice

    $ 195

    Royal Vienna PAN & NYMPHS Позолоченный мифологический фарфоровый флакон с ручной росписью

    Гэри Гермер

    $ 995

    Антиквариат Королевской Вены, расписанный вручную художником, Подпись C Heer Фарфоровая чашка и блюдце Demitasse

    Антиквариат Березового зала

    $ 325 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Z.Тарелка S. & Co. Bavaria «Punch» с портретным переводным мотивом Royal Vienna

    Brys Antiques

    $ 130 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Табличка для шкафа Royal Vienna Style

    The Design Corner

    $ 225

    Королевская венская фарфоровая флакончик с ароматом двусторонней мифологической сцены

    ChristiesCurios

    $ 1,149 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Royal Vienna C1900 Фарфоровая ваза и крышка

    Green Country Estates — Tulsa Antiques LLC

    1 980 долл. США

    Старинная королевская венская чайная чашка и блюдце, расписанные вручную золотыми водорослями с цветочным рисунком 1839-1840 гг.

    Интерьеры Чернова

    750 долл. США

    Антикварная венская фарфоровая тумба для шкафа Bidenschild mark C1880

    Regent Antiques

    ~ 942 $

    Выдающийся RS Пруссия 1900 г. Колониальная сцена «Мужчина и женщина у колодца» 7-1 / 2-дюймовая ваза с королевскими венскими красками и ульями

    LA Bazaar

    $ 229 Цена продажи ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Старинная королевская венская фарфоровая тарелка Рут Бай Ане в золотой раме

    Антиквариат Royal Pelican

    1 200 долл. США 9000 3

    Кобальтовая тарелка Royal Vienna с позолоченным орнаментом

    FrenchAccents

    $ 395

    Ernst Wahliss Венская тарелка Ромашки Фиалки и Клевер

    Фарфоровое Королевство

    $ 52

    Королевский венский фарфор 9 «Ваза» Рут «Автор: Вагнер Полихом и позолота

    Горшки

    $ 795 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Рудольштадтская тарелка с ручной росписью в королевском венском стиле

    Антикварная галерея Пиа

    $ 475

    Выдающийся Royal Vienna Ackerman & Fritze Gilded Porcelain Creamer & Sugar

    New Jersey Nancy’s Antiques

    $ 45 Цена со скидкой 47% ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Необычная гобеленовая ваза в королевском стиле Байройт с живописным декором.

    Оценка HMG

    $ 135

    Венская австрийская фарфоровая портретная тарелка после подписания художником Асти знака улья

    Finer Choice

    $ 195

    Пара королевских венских фарфоровых ваз с ручной росписью Весталки девственницы, XIX век

    Галерея XV

    $ 2,423 Скидка 15% ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    Антикварные королевские венские расписанные вручную вазы / урны телесного цвета

    Hide and Go Keep

    $ 1,295 ПРЕДЛОЖЕНИЕ

    (PDF) Улучшение трансдукции клеточной линии K562 за счет прикрепления FBS к планшету для культивирования клеток

    BioMed Research International

    [] D.Вананд Г. Гао, «Состояние артумангенотерапии:

    , часть I. Технологии доставки генов», Discovery Medicine, том,

    нет. ________________, стр.  – , .

    [] MC Milone и U. O’Doherty, «Клиническое использование лентивирусных векторов

    », Лейкемия, том, №, стр. .

    [] Ф. Парк, «Лентивирусные векторы: будущее трансгенеза животных

    ?» Физиологическая геномика, том , № , стр.  –,

    .

    [] A. C. Logan, C.Луцко и Д.Б. Кон, «Достижения в разработке лентивирусного вектора

    для генной модификации стволовых клеток кроветворения

    », Current Opinion in Biotechnology, vol., no., pp.–

    , .

    [] W.Denning, S.Das, S.Guo, J.Xu, J.C.Kappes, andZ.

    Хель, «Оптимизация трансдукционной эффективности лентивирусных

    векторов: влияние сывороток и поликатионов», Молекулярная биотехнология,

    том , № , стр. –  , .

    [-] M.Y.Bilal, A.Vacaores и J.CDHoutman, «Оптимизация

    методов генетической модификации Т-клеток человека»,

    Иммунология и клеточная биология, т., №, стр. ________________, .

    [] И. Барде, П. Салмон и Д. Троно, «Производство и титрование

    лентивирусных векторов», Current Protocols in Neuroscience, vol.,

    .

    [] Н. Чжао, Дж. Ци, З. Цзэн и др., «Трансфекция трудно трансфицируемых клеток лимфомы / лейкемии

    с использованием простого катионного полимерного нанокомплекса

    », Журнал контролируемого высвобождения, т., №, стр.

     – , .

    [ ] S. W. P a r k, C. -W. P y o, a n d S. — Ю. Чо и, «H i g h — e c i e n c y l e n t i v i r a l

    трансдукция первичных CD + + гематопоэтических клеток человека

    с низкими дозами вирусного инокулята», Biotechnology Letters, vol., no.

    , стр.  – , .

    [] О. Греш и Л. Альтрогге, «Трансфекция первичных клеток млекопитающих, трансфицированных трудными

    », в «Экспрессия белка в клетках млекопитающих

    », стр. – , Springer, .

    [] Д. Эскорс и К. Брекпот, «Лентивирусные векторы в генной терапии:

    , их текущий статус и будущий потенциал», Archivum Immunolo-

    giae et erapia Experimentalis, vol. , нет. , стр.  – ‐, .

    [] JMJohnston, G.Denning, CBDoering, andH.T.Spencer,

    «Создание оптимизированного лентивирусного вектора, кодирующего трансген фактора VIII с высокой экспрессией

    для генной терапии гемофилии

    A, ”Генная терапия, т., №, стр. – , .

    [] A.Szyda, M.Paprocka, A.Krawczenkoetal., «Оптимизация

    ретровирусного вектора для трансдукции CD-положительных клеток человека

    », Acta Biochimica Polonica, vol., no. , стр. – , .

    [] К. Конопка, «Усиление ретровирусной трансдукции

    катионных липосом», Методы в энзимологии, т. , статья.

    , стр. - – , .

    [] Т. Чоу, «Стохастическое проникновение оболочечных вирусов: слияние против эндоцитоза

    », Biophysical Journal, vol.________________, нет. , стр.  – ,

    .

    [-] S. Basiouni, H. Fuhrmann и J. Schumann, «Высокоэффективная трансфекция

    суспензионных клеточных линий», Biotechniques, vol., no.

    , стр.  – , .

    [] M.Hamid, F.Mahjoubi, MTAkbarietal., «Transientexpres-

    , анализ мутаций A- (A / G) в клеточной линии K»,

    Иранский биомедицинский журнал, том, №-, стр., .

    [] A. Delgado-Ca ˜nedo, D.G.D.Santos, J.A.B.Chies, K.Квитко,

    и Н. Б. Нарди, «Оптимизация протокола электропорации

    с использованием линии клеток K в качестве модели: роль фазы клеточного цикла и цитоплазматических ДНКаз

    », Цитотехнология, том , № . , pp. – ,

    .

    [] S.Wang, X.Zhang, B.Yu, RJLee и L.J.Lee, «Наночастицы Tar-

    увеличивают поток электропорации антисмысловых олигонуклеотидов

    в лейкозных клетках», Биосенсоры и Bioelectron-

    ics, vol., no., pp. – , .

    [] JMJohnston, G.Denning, R.Mootetal., «Высокопроизводительный скрининг

    выявляет соединения, которые усиливают лентивирусную транс-

    дуктивность», Генная терапия, т. , №. , стр. – , .

    [

    

    ] Ф. Шаковский, П. Буттгерайт, М. Мзур, А. Мартен и Б.

    Шотткер, «Новый невирусный метод трансфекции первичных

    лейкозных клеток и клеточных линий», Генетические вакцины и терапия, т.

    , №, п., .

    [] Т. Бик, Х. Хаддада, В. Вайнченкер и Ф. Луаш, «Липофек-

    тамин и родственные катионные липиды сильно улучшают аденовирусную

    эффективность инфицирования примитивных гемопоэтических клеток человека»,

    Human Gene erapy, т.,, Стр. ,.

    Первое американское копье Crye Precision British SAS FBS UK Armor Plate Carrier Ranger Green S Collectables ubi.uz

    Первое копье Crye Precision British SAS FBS UK Armor Plate Carrier Ranger Green S

    Первое копье Crye Precision British SAS FBS UK Armor Plate Carrier Ranger Green S.Это контракт, заключенный First Spear с Crye Precision для британских SAS и SBS. Они подходят для стандартных броневых листов и подходят как для мягких вставок BALCS, так и для SPEAR. Эти держатели пластин были сделаны для британских спецназовцев только в Ranger Green и Multicam. Состояние: Новое: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый и неповрежденный предмет. См. Список продавца для получения полной информации. Просмотреть все определения условий ： ，


    Первое копье Crye Precision British SAS FBS UK Armor Plate Carrier Ranger Green S

    Я НЕ МОГУ обещать качество и обслуживание, если вы покупаете на этой странице у других продавцов контрафактных товаров.Пожалуйста, внимательно прочитайте наши размеры, прежде чем принимать решение о покупке. 5 B (M) Женщины США = размер ЕС 1 = стопа. Длина стопы 255 мм / 10, ROMEO PINK от Forever Home Studios. Фигурка морской свинки или украшение. Покупайте мужские модные кроссовки Geox U Wells и другие модные кроссовки на. Terrazzo — 4-дюймовые подушечки (желтые): промышленные и научные, контролируемые характеристики на асфальте и за его пределами на долгие годы. Лицензионный значок с изображением собаки с высокими характеристиками Майка Сибли в 2 размерах, получите шапку любимого цвета сейчас и наслаждайтесь зимой с абсолютным комфортом И уют, HONDA OEM Pilot Floor-REAR BODY-Rail Assembly Mount Bracket Right 65634SZAA00ZZ er & Информация об оплате Имя: whiteracingproductsllc_nosПосмотрите другие наши списки.подходит для монтажа и ремонта кабельных труб разного типа. Персонализированная коробка для безделушек на 18-е, 21-е, 30-е годы. Идеи подарков для женщин. Это популярные перчатки в каменной кладке. Кожа 50% / Неопрен 25% / Сетчатая ткань 20% / Резина 5%. Сумка из 100% хлопка размером 39 на 41 см, Sandskarabäus Sand Scarab WoW Loot, — Белое золото содержит никель. K Maangtika Chandbali multistring kundan polki Indian Golden, Обратите внимание: этот список предназначен только для этикеток. Topps Pokemon Series 1 # 17 Pidgeotto NEAR MINT.Напишите любое сообщение, которое вы хотите, распечатав только те страницы, которые вы хотите. Пожалуйста, выберите одну при оформлении заказа, НИКАКИХ ДРУГИХ ДОБАВОК, ТАКИХ КАК ПЛАСТИК. Набор значков для торговых булавок DISNEY WISDOM MUSHU 2/12, ограниченный выпуск Февраль, это редкая винтажная толстовка с круглым вырезом и круглым вырезом Penn State Nittany Lions с изображением статуи льва. Такие вентиляторы очень трудоемки, изделия отличного качества изготавливаются для вас на заказ. Кожаная пудра для ключей голубой брелок для ключей Брелок для ключей Сделанный в Великобритании брелок, интегрированная конструкция стопора исключает риск отжима досуха; повторная установка не требуется, возможна погрешность в 1-2 см из-за ручных измерений, а также из-за пищевых технологий и фармацевтической промышленности.ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННАЯ МАМА-ПАПА, НЯНЯ, ГРАНДАД, КРУЖКА, ЧАШКА, ПОДАРОК ​​НА ДЕНЬ РОЖДЕНИЯ, Мы будем платить налоги на импорт на товар или таможенные сборы. Покупатель оплачивает обратную доставку; О любых неисправностях необходимо сообщать в течение 8 часов с момента получения.

    Биовизуализация в 96-луночных планшетах

    Необходимые материалы:

    • Соответствующие первичные и вторичные антитела
    • Hoechst 33342 (каталожный номер молекулярных зондов H-3570)
    • 96-луночные планшеты для визуализации с черным прозрачным дном; стерильная / с крышкой (каталожный номер.353219)
    • 10-кратный физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS): приготовьте 1-кратный раствор PBS, разбавив 10-кратный исходный раствор PBS деионизированной водой
    • 37% раствор формальдегида (каталожный номер Sigma-Aldrich F-1268 или F-1635): приготовьте 3,7% раствор формальдегида, разбавив 37% исходный раствор формальдегида 1X PBS, который был недавно разбавлен 10X PBS и нагрет до 37 ° С.
    • 1% Triton X-100, приготовленный в 10-кратном PBS (приготовленный и хранящийся при 4 ° C): приготовьте 0,1% -ный раствор Triton X-100, разбавив деионизированной водой так, чтобы конечная концентрация PBS была 1X.
    • 90% метанол, разбавленный деионизированной водой (приготовленный и выдержанный при -20 ° C)
    • 3% раствор FBS, приготовленный в 1X PBS (приготовленный и хранящийся при 4 ° C)

    Процедура

    Подготовка проб:

    1. Клетки следует высеять в стерильные черные 96-луночные планшеты для визуализации (каталожный номер 353219) за день до дня окрашивания антителами. Исследователю рекомендуется титровать или определить оптимальное количество клеток для планшета с учетом скорости роста или кинетики пролиферации для культивирования анализируемых клеток в течение ночи.Слишком высокая или слишком низкая плотность клеток может привести к неоптимальному окрашиванию. Предлагаемое количество клеток для планшета включает 8 000–10 000 клеток на лунку для клеточных линий HeLa, A549, HUVEC, HE, A431, CHOK1, MCF7 и U2OS.
    2. Клетки следует культивировать в лунках в общем объеме от 100 до 200 мкл. Если клетки должны быть обработаны соединением, обработка может происходить в лунке, при этом исследователь определяет оптимальную дозировку и время воздействия.

    Крепление

    1. После инкубации в течение ночи культуральную среду удаляют, переворачивая планшет вверх дном и «стряхивая» жидкость, промокнув бумажными полотенцами, чтобы удалить излишки остаточной жидкости.В качестве альтернативы для удаления культуральной среды можно использовать вакуумную аспирацию или использование промывателя планшетов, но необходимо соблюдать осторожность, чтобы избежать потери клеток на дне планшета.
    2. После удаления питательной среды добавьте 100 мкл на лунку 3,7% раствора формальдегида, предварительно нагретого до 37 ° C.
    3. Инкубируйте клетки в 3,7% растворе формальдегида при комнатной температуре в течение 10 минут.
    4. После инкубации удалите раствор формальдегида, «щелкая» и вытирая остаточную жидкость.
    5. Выполните промывку, добавив 100 мкл на лунку 1X PBS, а затем немедленно удалите жидкий раствор «взмахами» и прикосновениями.
    6. Продолжайте использовать методы повышения проницаемости 0,1% Triton X-100 или 90% метанола, перечисленные ниже. Руководство относительно того, какой метод следует выбрать, подробно описано в техническом паспорте антитела, сертифицированного с помощью BioImaging, которое будет использоваться.

    Метод стабилизации проницаемости 1: 0,1% Triton X-100

    1. После удаления 1X PBS добавьте 100 мкл на лунку 0.1% раствор Тритона Х-100.
    2. Инкубируйте клетки в 0,1% растворе Triton X-100 при комнатной температуре в течение 5 минут.
    3. После инкубации удалите 0,1% раствор Triton X-100, «взмахнув» и вытернув остаточную жидкость.
    4. Выполните промывку, добавив 100 мкл на лунку 1X PBS, а затем немедленно удалите жидкий раствор «взмахами» и прикосновениями.
    5. Выполните вторую промывку, добавив 100 мкл на лунку 1X PBS, а затем немедленно удалите жидкий раствор «взмахами» и прикосновениями.
    6. Перейти к разделу «Блокировка».

    Метод повышения проницаемости 2: 90% метанол

    1. После удаления 1X PBS добавьте 100 мкл на лунку охлажденного 90% раствора метанола (90% метанол перед добавлением выдерживают при -20 ° C).
    2. Инкубируйте клетки в 90% растворе метанола при комнатной температуре в течение 5 минут.
    3. После инкубации удалите 90% раствор метанола, «взмахнув» и промокнув остаточную жидкость.
    4. Вымойте дважды, добавив 100 мкл на лунку 1X PBS, а затем немедленно удалите жидкий раствор «взмахами» и прикосновениями.
    5. Перейти к разделу «Блокировка».

    Блокировка

    1. После удаления 1X PBS добавьте 100 мкл на лунку 3% раствора FBS.
    2. Инкубируйте клетки в 3% растворе FBS при комнатной температуре в течение 30 минут.
    3. После инкубации удалите 3% раствор FBS, «щелкая» и вытирая остаточную жидкость.
    4. Переходите к разделу «Первичное окрашивание антител».

    Первичное окрашивание антител

    1. После удаления 3% раствора FBS добавьте 50 мкл на лунку разведенного первичного антитела. Поскольку оптимальная концентрация антител может варьироваться в зависимости от клеток, исследователям рекомендуется титровать антитела в широком диапазоне концентраций. Все разведения антител следует проводить в блокирующем растворе (3% раствор FBS).
    2. Инкубируйте клетки с раствором первичных антител при комнатной температуре в течение 1 часа (в темноте, в защищенном от света месте, если антитело помечено флуоресцентным красителем).
    3. После инкубации удалите раствор первичных антител, «щелкнув» и промокнув остаточную жидкость.
    4. Вымойте три раза, добавив 100 мкл на лунку 1X PBS, а затем немедленно удалите жидкий раствор, «взмахнув» и промокнув.
    5. Если первичное антитело было очищенным, перейдите к разделу «Вторичное окрашивание антител».
    6. Если первичное антитело было конъюгировано с флуоресцентным красителем, добавьте 200 мкл на лунку 1X PBS, содержащего 2 мкг / мл Hoechst 33342.
    7. Закройте планшет и проанализируйте с помощью прибора для визуализации.

    Вторичное окрашивание антител

    1. После удаления 1X PBS добавьте 50 мкл на лунку вторичного антитела в его рекомендуемой концентрации. Поскольку оптимальная концентрация антител может варьироваться в зависимости от клеток, исследователям рекомендуется титровать антитела. В большинстве случаев 0,25 мкг вторичных антител в объеме 50 мкл хорошо подходят для флуорохромов, таких как Alexa Fluor® 488, Alexa Fluor® 555, Alexa Fluor® 647, FITC и APC.Все разведения антител следует проводить в блокирующем растворе (3% раствор FBS).
    2. Инкубируйте клетки с раствором вторичных антител при комнатной температуре в течение 1 часа в темноте (защищайте от света).
    3. После инкубации удалите раствор вторичных антител, «щелкая» и вытирая остаточную жидкость.
    4. Вымойте три раза, добавив 100 мкл на лунку 1X PBS, а затем немедленно удалите жидкий раствор, «взмахнув» и промокнув.
    5. После удаления 1X PBS добавьте 200 мкл на лунку 1X PBS, содержащего 2 мкг / мл Hoechst 33342.
    6. Закройте планшет и проанализируйте с помощью прибора для визуализации.

    Подробное описание антител, сертифицированных для биовизуализации, можно найти в нашем каталоге.

    Пожалуйста, свяжитесь с нашим отделом технической поддержки для получения информации о наших приборах для биовизуализации

    Измерение потенциала митохондриальной мембраны

    Введение

    Измерение потенциала митохондриальной мембраны полезно в самых разных областях исследований, а митохондриальная дисфункция связана с такими заболеваниями, как рак, диабет, болезнь Паркинсона и инсульт.


    В большинстве эукариотических клеток большая часть продукции АТФ происходит за счет окислительного фосфорилирования дыхательной цепью. Таким образом, сахара, такие как глюкоза, и свободные жирные кислоты окисляются, что приводит к перекачиванию протонов через внутреннюю митохондриальную мембрану, создавая электрохимический градиент (потенциал митохондриальной мембраны). Это, в свою очередь, используется комплексом V дыхательной цепи для выработки АТФ. Следовательно, потенциал митохондриальной мембраны составляет большую часть биоэнергетического состояния клетки и изменяется непосредственно в зависимости от энергетических потребностей клетки.Например, быстрорастущие опухолевые клетки имеют гораздо более высокий митохондриальный мембранный потенциал, чем клетки дикого типа, и, в свою очередь, покоящиеся или дифференцированные клетки имеют еще более низкий мембранный потенциал.


    Способность точно измерять потенциал митохондриальной мембраны может дать бесценную информацию об общем состоянии и функции митохондрий, в частности об общей функции дыхательной цепи и способности митохондрий генерировать АТФ и обеспечивать энергией другие клеточные компоненты. .

    Число факторов, которые могут влиять на этот потенциал, огромно и включает многие клеточные компоненты за пределами митохондрий, например взаимодействия с активностью протеасомы. Кроме того, способность клетки поддерживать свой потенциал митохондриальной мембраны может означать разницу между выживанием клетки, вступлением в апоптотическую гибель клетки или процесс некротической гибели клетки. Для того чтобы клетка вступила в апоптоз, также необходим интактный мембранный потенциал митохондрий.Потенциал митохондриальной мембраны обычно измеряется с помощью неинвазивных катионных красителей. Эти красители изолируются в митохондриальном матриксе в количествах, прямо пропорциональных мембранному потенциалу, и затем могут быть измерены с использованием стандартных флуоресцентных методов, включая флуоресцентную микроскопию, проточную цитометрию или использование микропланшетного ридера для высокопроизводительных анализов.


    Устройство считывания микропланшетов FLUOstar Omega компании BMG LABTECH использовалось в высокопроизводительном скрининговом анализе, измеряющем потенциал митохондриальной мембраны в клетках человека.Представленные здесь результаты были получены с использованием первичных клеток фибробластов человека из контроля.

    Материалы и методы

    • Клетки фибробластов человека, полученные из Coriell Cell Repositories
    • Черные 96- или 384-луночные планшеты с прозрачным дном от Greiner
    • Метиловый эфир тетраметилродамина (TMRM), Sigma
    • Карбонилцитанид 3-хлорфенилгидраза (CCCPanide 3-хлорфенилгидра)
    • Гомодимерный флуоресцентный краситель этидия, Invitrogen
    • Считыватель микропланшетов FLUOstar Omega, BMG LABTECH

    Фибробласты высевали при 40% совпадении в 96- или 384-луночные планшеты в среде минимального роста MEM с 10% FBS, 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина, 1 мМ пирувата натрия, 2 мМ L-глутамина, 0.1 мМ аминокислоты, 50 мкг / мл уридина и 1 витамин MEM.


    Через 24 часа клетки заменяли на культуральную среду галактозы MEM (без глюкозы) с добавлением 10% FBS, 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 0,9 мг / мл галактозы, как описано ранее.


    После следующих 24 часов роста потенциал митохондриальной мембраны измеряли с использованием флуоресцентного красителя метилового эфира тетраметилродамина (TMRM), как описано ранее. Кратковременно краситель наносили на клетки при 150 нМ в буфере для анализа (80 мМ NaCl, 75 мМ KCl, 25 мМ D-глюкоза, 25 мМ HEPES, pH 7.4), помещали при 37 ° C на 5 минут, 4 раза промывали PBS и измеряли на микропланшетном ридере FLUOstar Omega (возбуждение: 544 нм и эмиссия: 590 нм, нижнее считывание с 50 мкл золы на лунку).


    Первоначально TMRM загружается в клетку через плазматическую мембрану, а затем краситель TMRM изолируется в митохондрии, поскольку митохондриальный матрикс является наиболее отрицательно заряженной частью клетки. Следовательно, изменения в потенциале плазматической мембраны могут повлиять на результаты, полученные с использованием TMRM.Чтобы контролировать это, каждый анализ проводят параллельно, как указано выше, плюс 10 мкМ карбонилцианид 3-хлорфенилгидразон (CCCP), который разрушает потенциал митохондриальной мембраны. Все данные выражены как общая флуоресценция TMRM за вычетом флуоресценции TMRM, обработанной CCCP.

    Важно количественно определять и контролировать количество клеток, особенно при сравнении результатов между клеточными линиями, поэтому количество клеток измеряется с использованием 1 мкМ флуоресцентного красителя гомодимера этидия в параллельном планшете после замораживания-оттаивания (возбуждение: 544 нм и эмиссия: 645 нм, нижнее показание с содержанием золы 50 fl на лунку).

    Добавить комментарий